一種防治炭疽病的液體肥料及其制備方法與流程

文檔序號:18080806發布日期:2019-07-03 05:13
本發明屬于液體肥料的
技術領域
,更具體地,涉及一種防治炭疽病的液體肥料及其制備方法。
背景技術
:辣椒為一年或有限多年生草本植物,果實通常呈圓錐形或長圓形,未成熟時呈綠色,成熟后變成鮮紅色、綠色或紫色,以紅色最為常見。辣椒的果實因果皮含有辣椒素而有辣味,能增進食欲。辣椒中維生素C的含量在蔬菜中居第一位,原產墨西哥,明朝末年傳入中國。辣椒原產于中拉丁美洲熱帶地區,原產國是墨西哥。在中國主要分布在四川,貴州,湖南,云南,陜西、河南(淅川縣)、河北省雞澤縣和內蒙古托克托縣。鏈霉菌屬(streptomyces)是放線菌目的一屬。基內菌絲不斷裂,氣生菌絲通常發育良好,形成長(有時短)的孢子絲。孢子不能運動,外鞘上常有疣、刺或毛發等狀飾物。鏈霉菌廣泛存在于土壤中,是絲狀的革蘭氏陽性細菌,主要通過孢子繁殖,絕大多數鏈霉菌對人體無害。鏈霉菌是產生各種抗生素的主要來源,源于鏈霉菌的抗生素包括紅霉素、四環素、鏈霉素、氯霉素、新霉素、制霉菌素、卡那霉素、放線菌酮和兩性霉素等,因此,對于鏈霉菌的已有研究主要集中于菌株產生抗菌活性物質的能力和大小等方面。辣椒發育過程中經常出現濕潤狀、褐色橢圓形或不規則形病斑、莖和果梗出現不規則短條形凹陷的褐色斑等現象,導致爛果、壞果多,嚴重降低了辣椒產量,同時采摘的果實易受病菌感染、易腐壞,因此產生防治炭疽病的養料刻不容緩。技術實現要素:本發明要解決的技術問題是克服現有辣椒易患炭疽病、產量低、植株抵抗力差的問題,提供一種防治炭疽病的液體肥料及其制備方法。本發明上述目的通過以下技術方案實現:一種防治炭疽病的液體肥料,由以下重量份的物質組成:活性液體肥基底制劑1000份、鏈霉素0.01~3份、五水硫酸銅1~8份、咪鮮胺0.01~3份、殼寡糖0.01~3份、硝酸銨鈣37~49份、多肽氨基酸165~178份、磷酸二氫鉀30~40份、氯化鉀50~63份、硫酸鎂15~25份、硼砂0.1~5份、碳酸鋅0.1~5份、硫酸錳0.1~5份;所述液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量≥130g/L;所述活性液體肥基底制劑由鏈霉菌屬菌株“TY-001#”發酵得到;鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的培養基為:取大豆進行浸泡或取豆粕進行預發酵后,進行打漿、過濾;然后往濾液中加入糖后,加水定容至培養基中糖的濃度≥100g/L,pH為7.4~7.6;所述鏈霉菌屬菌株“TY-001#”于2017年3月24日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心,分類命名為Streptomyces.,其保藏編號為GDMCCNo.:60152,保藏地址是中國廣東省廣州市先烈中路100號省微生物所實驗樓五樓。本發明中的液體肥料中氮以多肽氨基酸的形式存在更易于植物吸收利用,鏈霉素與五水硫酸銅按比例混合能有效提高植株抵抗力,有效防止植株防治炭疽病,同時植株對氨基酸液肥的高吸收率,有效防止多余肥料對環境的污染。優選地,所述液體肥料由以下物質組成:活性液體肥基底制劑1000份、鏈霉素0.1~2份、五水硫酸銅2~6份、咪鮮胺0.1~1份、殼寡糖0.1~1份、硝酸銨鈣40~46份、多肽氨基酸169~175份、磷酸二氫鉀33~38份、氯化鉀54~60份、硫酸鎂18~23份、硼砂0.5~3份、碳酸鋅0.3~2份、硫酸錳0.3~2份;所述液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量≥130g/L。優選地,所述液體肥料由以下物質組成:活性液體肥基底制劑1000份、鏈霉素1份、五水硫酸銅5份、咪鮮胺0.2份、殼寡糖0.8份、硝酸銨鈣43份、多肽氨基酸173份、磷酸二氫鉀35份、氯化鉀57份、硫酸鎂20份、硼砂1份、碳酸鋅1份、硫酸錳1份;所述液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量≥130g/L。進一步地,所述液體肥料中N、P、K的重量比為4~8:1:4~8,優選5:1:5。進一步地,所述液體肥料中鈣、鎂、磷的重量比為2:1:2。進一步地,所述硼砂、碳酸鋅、硫酸錳份數比為1:1:1。一種所述防治炭疽病的液體肥料的制備方法,包括以下步驟:S1.制備培養基:取大豆進行浸泡或取豆粕進行預發酵后,進行打漿、過濾;然后往濾液中加入糖后,加水定容至培養基中糖的濃度≥100g/L,pH為7.4~7.6;S2.接種:取鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的液體菌種,接種到培養基中,攪拌均勻;S3.發酵:在發酵過程中往培養基中持續通入氧氣,于20~28℃下持續發酵7~8天后,得到發酵液;S4.終止發酵:將發酵液灌裝密閉靜置15天,得到所述活性液體肥基底制劑;S5.液體肥料的配置:往所述活性液體肥基底制劑添加鏈霉素、五水硫酸銅、咪鮮胺、殼寡糖、硝酸銨鈣、多肽氨基酸、磷酸二氫鉀、氯化鉀、硫酸鎂、硼砂、碳酸鋅、硫酸錳得到所述液體肥料。進一步地,所述預發酵的步驟為:S11.往豆粕中加水,并攪拌充分均勻,直至豆粕用手緊捏達到滴水成線的狀態即可;S12.用薄膜覆蓋在豆粕表面,不留縫隙,計時開始預發酵過程;S13.預發酵時間為3~5天;開始發酵2天后,將溫度計插入豆粕深處,發酵原料內部溫度≥40℃時,將預發酵豆粕里外翻轉一次,繼續發酵2~3天。優選地,所述步驟S1中加水定容至培養基中糖的濃度為100g/L。優選地,所述活性液體肥基底制劑存放15天后其氨基態氮含量≥4.8g/L。優選地,所述液體菌種中每毫升有2億個活菌;所述液體菌種與培養基的比例為165g:250L。優選地,鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的形態特征為:菌落呈圓形,乳白色,邊緣光滑,表明有煉乳狀光澤;孢子革蘭氏染色呈陽性。一種所述鏈霉菌屬菌株(Streptomyces)的培養方法,包括以下步驟:Y1.取鏈霉菌屬菌株“TY-001#”劃線于固體培養基上,25~30℃倒置活化培養3~7天,制得活化后菌株;Y2.取步驟S1制得的活化后菌株接種至液體培養基中,在溫度為25~30℃、轉數為150~220轉/分鐘的條件下,搖床培養3~7天,得到菌液。優選地,所述液體培養基每升組分如下:取大豆、豆粕100g磨成豆漿過濾,棄渣;白砂糖、蔗糖或紅糖100g;水定容至1升,pH為7.4~7.6。優選地,所述液體培養基每升組分如下:牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化鈉5.0g,水定容至1升,pH為7.4~7.6。優選地,所述固體培養基每升組分如下:牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂15~25g,水定容至1升,pH為7.4~7.6。與現有技術相比,本發明具有以下有益效果:本發明的液體肥料能夠有效防止果實防治炭疽病,顯著提高辣椒的果實品質,快速補充辣椒生長所需的養分,促進花果生長,有利于提高辣椒植株的抵抗力。施用本發明的液體肥料的辣椒幼苗無患炭疽病的現象,而成熟植株患病率為0.07%,相比對照組的9.2%,其防治炭疽病作用顯著。本發明中的液體肥料中氮以多肽氨基酸的形式存在更易于植物吸收利用,鏈霉素與五水硫酸銅按比例混合能有效提高植株抵抗力,有效防止植株防治炭疽病,同時植株對氨基酸液肥的高吸收率,有效防止多余肥料對環境的污染。本發明提供的鏈霉菌屬菌株“TY-001#”,該菌株能夠適應高滲透壓下通氣發酵培養。具體實施方式以下結合具體實施例來進一步說明本發明,但實施例并不對本發明做任何形式的限定。除非特別說明,本發明采用的試劑、方法和設備為本
技術領域
常規試劑、方法和設備。除非特別說明,以下實施例所用試劑和材料均為市購。實施例1鏈霉菌屬菌株(Streptomyces)的分離與鑒定1.實驗材料和條件(1)在湖南省郴州市某地采集到的土壤樣品。(2)液體培養基每升組分如下:牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化鈉5.0g,水定容至1升,pH為7.5。固體培養基每升組分如下:牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂15~25g,水定容至1升,pH為7.5。培養基分裝,高壓滅菌鍋滅菌(121℃,30min)。(3)無菌操作條件:所有器皿和用具均須經高壓滅菌鍋滅菌(121℃,30min),接種等操作均在超凈工作臺內進行。(4)菌株培養條件:置于25±1℃光照恒溫箱(14L:10D)中培養,待菌落形成后,轉移到PDA斜面,再轉入5℃冰箱內保存。2.菌株分離與篩選(1)從湖南省郴州市某地的土壤樣品中分離獲得一株鏈霉菌屬菌株T0。(2)將分離得到的鏈霉菌屬菌株T0接入固體培養基中斜面繼代培養,再轉入5℃冰箱內保存。(3)將繼代培養的菌株T0于液體培養基中,在振蕩搖床上220轉/分鐘,25℃條件下培養5天。(4)培養5天后的T0液體菌,放置于20瓦紫外線燈25cm處照射2小時。(5)將照射后的T0液體菌接入固體斜面培養基中25℃下培養5天,然后挑出長得最好的存活菌落接入固體培養基繼代培養。(6)重復若干遍步驟(2)~(5)的過程循環。在每一遍重復過程循環中,固體培養基和液體培養基中的氯化鈉用量都增加1克,直至固體培養基和液體培養基中的氯化鈉用量達到25克。將最終存活的健壯菌株進行繼代培養,再轉入5℃冰箱內保存。(7)將以上篩選出的耐高滲透壓菌株T0,進行發酵生產試驗。經7天25℃敞開有氧發酵后,測定發酵液中氨基態氮(按甲醛滴定法測定氨基氮標準檢測),挑選出氨基態氮含量(≥0.7mg/L)最高的菌株作為最終生產用菌株,命名“TY-001#”。發酵生產試驗所用的培養基如下:取大豆100g磨成豆漿過濾,棄豆渣;白砂糖100g,定容至1000mL,pH為7.5。3.菌株“TY-001#”的鑒定(1)形態學鑒定形態特征為:菌落呈圓形,乳白色,邊緣光滑,表明有煉乳狀光澤;孢子革蘭氏染色呈陽性。形態學鑒定顯示,該菌株屬于鏈霉菌屬。綜上所述,菌株“TY-001#”為鏈霉菌屬,于2017年3月24日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心,其保藏編號為GDMCCNo.:60152,保藏地址是中國廣州市先烈中路100號省微生物所實驗樓五樓。實施例2一種防治炭疽病的液體肥料的制備和應用一種防治炭疽病的液體肥料的制備方法包括以下步驟:S1.制備培養基:取1000g大豆浸泡10h后,放入磨漿機中磨成豆漿,濾去豆渣,將濾液置于干凈的發酵桶中,然后往濾液中加入白砂糖后,加水定容至培養基中糖的濃度100g/L,pH為7.5;S2.接種:取鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的液體菌種,接種到培養基中,攪拌均勻;液體菌種中每毫升有2億個活菌;液體菌種與培養基的比例為165g:250L;S3.發酵:開啟氧氣泵,在發酵過程中往發酵桶中持續通入氧氣,并根據發酵桶中單獨漿液氣泡情況,加入適量的消泡劑。發酵桶用透氣膜覆蓋,以免落入雜物,于25℃下持續發酵7天后,得到發酵液;S4.終止發酵:將發酵液灌裝密閉靜置15天,得到活性液體肥基底制劑。S5.液體肥料的配置:往1000份活性液體肥基底制劑中添加鏈霉素0.1份、五水硫酸銅2份、咪鮮胺0.1份、殼寡糖0.1份、硝酸銨鈣40份、多肽氨基酸169份、磷酸二氫鉀33份、氯化鉀54份、硫酸鎂18份、硼砂0.5份、碳酸鋅0.3份、硫酸錳0.3份得到液體肥料;所得液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量為≥130g/L。實施例3一種防治炭疽病的液體肥料的制備和應用一種防治炭疽病的液體肥料的制備方法包括以下步驟:S1.制備培養基:取1000g大豆浸泡10h后,放入磨漿機中磨成豆漿,濾去豆渣,將濾液置于干凈的發酵桶中,然后往濾液中加入白砂糖后,加水定容至培養基中糖的濃度100g/L,pH為7.5;S2.接種:取鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的液體菌種,接種到培養基中,攪拌均勻;液體菌種中每毫升有2億個活菌;液體菌種與培養基的比例為165g:250L;S3.發酵:開啟氧氣泵,在發酵過程中往發酵桶中持續通入氧氣,并根據發酵桶中單獨漿液氣泡情況,加入適量的消泡劑。發酵桶用透氣膜覆蓋,以免落入雜物,于25℃下持續發酵7天后,得到發酵液;S4.終止發酵:將發酵液灌裝密閉靜置15天,得到活性液體肥基底制劑。S5.液體肥料的配置:往1000份活性液體肥基底制劑中添加鏈霉素0.01份、五水硫酸銅1份、咪鮮胺0.01份、殼寡糖0.01份、硝酸銨鈣37份、多肽氨基酸165份、磷酸二氫鉀30份、氯化鉀50份、硫酸鎂15份、硼砂0.1份、碳酸鋅0.1份、硫酸錳0.1份得到液體肥料;所得液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量為≥130g/L。實施例4一種防治炭疽病的液體肥料的制備和應用一種防治炭疽病的液體肥料的制備方法包括以下步驟:S1.制備培養基:取1000g大豆浸泡10h后,放入磨漿機中磨成豆漿,濾去豆渣,將濾液置于干凈的發酵桶中,然后往濾液中加入白砂糖后,加水定容至培養基中糖的濃度100g/L,pH為7.5;S2.接種:取鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的液體菌種,接種到培養基中,攪拌均勻;液體菌種中每毫升有2億個活菌;液體菌種與培養基的比例為165g:250L;S3.發酵:開啟氧氣泵,在發酵過程中往發酵桶中持續通入氧氣,并根據發酵桶中單獨漿液氣泡情況,加入適量的消泡劑。發酵桶用透氣膜覆蓋,以免落入雜物,于25℃下持續發酵7天后,得到發酵液;S4.終止發酵:將發酵液灌裝密閉靜置15天,得到活性液體肥基底制劑。S5.液體肥料的配置:往1000份活性液體肥基底制劑中添加鏈霉素1份、五水硫酸銅5份、咪鮮胺0.2份、殼寡糖0.8份、硝酸銨鈣43份、多肽氨基酸173份、磷酸二氫鉀35份、氯化鉀57份、硫酸鎂20份、硼砂1份、碳酸鋅1份、硫酸錳1份得到液體肥料;所得液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量為≥130g/L。實施例5一種防治炭疽病的液體肥料的制備和應用一種防治炭疽病的液體肥料的制備方法包括以下步驟:S1.制備培養基:取1000g大豆浸泡10h后,放入磨漿機中磨成豆漿,濾去豆渣,將濾液置于干凈的發酵桶中,然后往濾液中加入白砂糖后,加水定容至培養基中糖的濃度100g/L,pH為7.5;S2.接種:取鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的液體菌種,接種到培養基中,攪拌均勻;液體菌種中每毫升有2億個活菌;液體菌種與培養基的比例為165g:250L;S3.發酵:開啟氧氣泵,在發酵過程中往發酵桶中持續通入氧氣,并根據發酵桶中單獨漿液氣泡情況,加入適量的消泡劑。發酵桶用透氣膜覆蓋,以免落入雜物,于25℃下持續發酵7天后,得到發酵液;S4.終止發酵:將發酵液灌裝密閉靜置15天,得到活性液體肥基底制劑。S5.液體肥料的配置:往1000份活性液體肥基底制劑中添加鏈霉素3份、五水硫酸銅8份、咪鮮胺3份、殼寡糖3份、硝酸銨鈣49份、多肽氨基酸178份、磷酸二氫鉀40份、氯化鉀63份、硫酸鎂25份、硼砂5份、碳酸鋅5份、硫酸錳5份得到液體肥料;所得液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量為≥130g/L。對比例1一種防治炭疽病的液體肥料的制備和應用一種防治炭疽病的液體肥料的制備方法包括以下步驟:S1.制備培養基:取1000g大豆浸泡10h后,放入磨漿機中磨成豆漿,濾去豆渣,將濾液置于干凈的發酵桶中,然后往濾液中加入白砂糖后,加水定容至培養基中糖的濃度100g/L,pH為7.5;S2.接種:取鏈霉菌屬菌株“TY-001#”的液體菌種,接種到培養基中,攪拌均勻;液體菌種中每毫升有2億個活菌;液體菌種與培養基的比例為165g:250L;S3.發酵:開啟氧氣泵,在發酵過程中往發酵桶中持續通入氧氣,并根據發酵桶中單獨漿液氣泡情況,加入適量的消泡劑。發酵桶用透氣膜覆蓋,以免落入雜物,于25℃下持續發酵7天后,得到發酵液;S4.終止發酵:將發酵液灌裝密閉靜置15天,得到活性液體肥基底制劑。S5.液體肥料的配置:往1000份活性液體肥基底制劑中添加鏈霉素1份、咪鮮胺0.2份、殼寡糖0.8份、硝酸銨鈣43份、多肽氨基酸173份、磷酸二氫鉀35份、氯化鉀57份、硫酸鎂40份、硼砂1份、碳酸鋅1份、硫酸錳1份得到液體肥料;所得液體肥料中總氮含量≥2.5mg/g,氨基氮含量≥0.4mg/g,有機質含量≥130g/L。防治炭疽病的液體肥料的應用效果評價:多元素液體肥料能快速補充果植株生長所需的養分,有效防止防治辣椒炭疽病、促進辣椒生長發育,提高辣椒果實品質。為驗證本發明制備的液體肥料在辣椒上大面積示范應用的實際效果,申請人選擇在美人椒上進行了試驗示范。1材料與方法1.1供試地點1設在資興市某辣椒基地內,試驗地面積5畝,土壤肥力水平較均勻。供試地點2設在建寧市某小番茄基地內,試驗地面積5畝,土壤肥力水平較均勻。1.2供試作物1美人椒,植株行距0.6m*0.6m,長勢中庸且一致。供試作物2小番茄,植株行距0.6m*0.6m,長勢中庸且一致。1.3供試肥料為實施例2~5制得的促進辣椒花芽發育的液體肥料,產品劑型為液體。1.4每個供試地點均進行2個試驗處理:①實驗組:種植后每個月澆施一次供試肥料,每次500mL/畝,稀釋200倍。②對比例組:每畝每次以同實驗組等量的對比例1制備的化肥同時期進行,其他施肥措施同處理①。實驗組和對比例組均按當地常規栽培技術進行管理。試驗各處理以每畝為小區,每個處理中隨機抽取100平方米的植株,重復3次,管理一致,觀察株體生長情況,統計辣椒植株患炭疽病數量的平均值,計算防治炭疽病率。2結果與分析2.1對美人椒防治炭疽病的影響經測算,每100平米栽種260株辣椒樹,由表1可知,使用了該液體肥料的成熟辣椒植株患病率僅0.07%,而對照組高達9.2%;幼苗時期的患病率為零,其防治炭疽病效果非常可觀,防治炭疽病作用遠遠大于對比例組。然而,對于小番茄的防治炭疽病的效果并不明顯,其對幼苗和成熟植株的影響相比對比例組較小,因此,本發明所制備的液體肥料其防治炭疽病的效果具有高度選擇性。表1對辣椒不同處理的防治炭疽病數情況結果2.2對畝產量的影響統計每畝株數,隨機10點取樣,統計掛果數,稱鮮果重,計算掛果數、單個鮮果重的平均值,測算理論畝產量。經測算,每畝栽種1800株植株,分別抽取10株植株掛果數、單個鮮果均重、果穗數和畝產量的平均值如表2。由表2可知,使用了該液體肥料的美人椒單個鮮果重相比對比例組增加了21.6%,實現畝產量增長兩倍多,效果非常可觀。然而,該液體肥料對小番茄的保果率和畝產量增加僅有較為小的作用。可見,本發明的液體肥料對辣椒的保花保果具有十分顯著的效果,對不同品種的蔬果具有較高的選擇性。表2辣椒不同處理的結果情況及畝產量處理果穗掛果數/個鮮果均重/g畝產量/kg美人椒實驗組6214.11573.6美人椒對比例組3011.6626.4以上所述僅為本發明的優選實施例,并不用于限制本發明,對于本領域的技術人員來說,本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內,所作的任何修改、等同替換、改進等,均應包含在本發明的包含范圍之內。當前第1頁1 2 3 
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